Analyse par spectrophotométrie en laboratoire

La spectrophotométrie, méthode analytique quantitative utilisée dans nos laboratoires sert à mesurer l’absorbance ou la densité optique d’une substance chimique donnée dans une solution. Le fonctionnement de ce type d’analyse est d’identifier la présence et la quantité présente d’une molécule en mesurant le niveau d’absorption (ou densité optique) de cette dernière dans une solution testée via l’utilisation d’un spectrophotomètre.

De façon plus simple, on fait passer de la lumière à une certaine longueur d’onde afin de détecter la présence d’une molécule prédéfinie par sa capacité à absorber cette lumière. Pour que ce type d’analyse soit pleinement efficace, le spectrophotomètre utilisé doit donc être préalablement calibré sur la longueur d’onde d’absorption de l’espèce chimique dont l’on souhaite vérifier la présence.

Le fonctionnement en détail d’un spectrophotomètre

Un spectrophotomètre fonctionne sur le principe suivant : il mesure l’absorbance d’une solution à une longueur d’onde donnée. Un monochromateur génère à partir d’une source de lumière visible ou ultraviolette une lumière monochromatique, dont la longueur d’onde est choisie par l’utilisateur et qui est comprise entre 250 et 800 nm (200 à 400nm = UV / 400 à 800nm = Visible).

Cette lumière calibrée est ensuite projetée pour que celle-ci traverse une cuve contenant la solution à étudier. Le spectrophotomètre va ensuite venir mesurer l’intensité de la lumière transmise. La valeur affichée par le spectrophotomètre sera proportionnelle à la quantité de métanolite présent dans l’échantillon, à une longueur d’onde spécifique. Cette valeur permettra ainsi de déterminer la molécule que l’on souhaite trouver dans la solution est effectivement bien présente.

La spectrophotométrie avec UV-visible

Certaines solutions absorbent directement dans l’ultraviolet dont la longueur d’onde est inférieure à 380nm (la lumière visible a une longueur d’onde entre 400 et 800nm). Pour les solutions qui absorbent donc dans l’ultraviolet, le procédé d’identification est alors de la spectrophotométrie UV.

A noter que les infrarouges ne sont pas utilisés en spectrophotométrie, car ils dépendent surtout de la température.

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